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四大經(jīng)典核酸純化方法及評價(jià)

   2025-05-16 河南惠爾納米科技(生物)有限公司589
核酸抽提與純化是分子生物學(xué)試驗(yàn)的基礎(chǔ),核酸純化方法是影響提取核酸質(zhì)量高低的最重要因素,也是下游分子生物學(xué)試驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。目前常見的核酸純化方法有PC 抽提/醇沉淀方法、高鹽沉淀蛋白質(zhì)/醇沉淀方法、離心柱法和生物磁珠法,這幾種方法各有其優(yōu)勢和劣勢。
一、PC抽提法
PC 抽提是去除蛋白質(zhì)有效的手段,但超過了該飽和度,裂解體系中的蛋白質(zhì)不會被一次去除,必須靠多次抽提,方可徹底去除。且每次抽提都會損失部分核酸。另外,體系太粘稠的壞處是,蛋白質(zhì)難以徹底去除,以及基因組 DNA 會斷裂得更厲害,所以要注意裂解液與樣品的比例。PC 抽提的另外一個(gè)用途是,利用酸性酚可以部分去除 DNA 的特點(diǎn),在 RNA 抽提時(shí)獲得 DNA 殘留極少的 RNA。不過有一點(diǎn)要提醒的是,某些植物樣品,在去除某些雜質(zhì)之前,是不能使用 PC 抽提的,否則核酸必定降解。PC抽提最大的優(yōu)勢是成本低廉,對實(shí)驗(yàn)條件要求較低,對于經(jīng)費(fèi)緊張的實(shí)驗(yàn)室較為實(shí)用。
二、高鹽沉淀法
高鹽沉淀蛋白質(zhì)/醇沉淀方法,同樣也是一個(gè)非常不錯的方法。與 PC 抽提方法相比,除了純度的穩(wěn)定性可能要低一點(diǎn)外,該方法幾乎克服了 PC 抽提的所有缺點(diǎn)。更快、更輕松的去除蛋白質(zhì)所可以用于大規(guī)模抽提,但其不足之處是純度 (蛋白質(zhì)殘留) 不夠穩(wěn)定,蛋白質(zhì)的沉淀效率在4℃會更好一些。
三、離心柱法
離心柱純化法,是目前試劑盒提取廣泛應(yīng)用的方法。其最大特點(diǎn)是受人為操作因素影響小,純度的穩(wěn)定性很高 (雖然純度不一定比PC 純化方法更高)。加入的液體通過離心后會進(jìn)入另外一個(gè)離心管中,與含有核酸的柱子完全是分開的,所以洗滌更徹底。其致命弱點(diǎn)是樣品過量,提取效率較低,且需要反復(fù)離心,操作復(fù)雜,成本也較高。
四、生物磁珠法
生物磁珠法是將純化介質(zhì)包被在納米級生物磁珠表面,通過介質(zhì)對核酸的吸附,在外加磁場下使核酸附著于磁珠定向移動,從而達(dá)到固液分離純化的作用。與其他幾種方法相比,生物磁珠法具有很多無法比擬的優(yōu)勢,如:
①提取靈敏度高(微量材料即可提?。?/DIV>
②純化純度高(完全與蛋白鹽等雜質(zhì)分離)
③提取產(chǎn)量高(每mg磁珠能吸附500ug DNA)
④分離快速(磁分離只需幾秒)
⑤自動化操作(加液后完全機(jī)器自動化操作,無需人力,提高效率)
⑥高通量提?。赏瑫r(shí)完成幾十甚至幾百個(gè)樣品的提?。?/DIV>
⑦無毒無害無污染(試劑中不含任何氯仿、酚等,操作環(huán)境更加安全)
生物磁珠法純化核酸的普及需要磁分離裝置的同步跟進(jìn),如磁力架或自動提取儀。目前,各類磁分離裝置主要來自于進(jìn)口,不僅價(jià)格較高,而且售后服務(wù)質(zhì)量也偏低。因此,向大家推薦洛陽惠爾納米科技園自主研發(fā)的磁力架、磁力筆及全自動核酸提取儀,該裝置通過技術(shù)創(chuàng)新,大大提高了靈活機(jī)動性,在操作上更加方便快捷,有效解決了磁分離裝置對磁珠法核酸提取的限制,受到科研工作者的一致好評。
 
 
標(biāo)簽: 核酸純化
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